Substances that inhibit the growth of Mycobacterium tuberculosis could potentially be used as antibiotics. These substances could also be added to test culture media to improve the speed of tuberculosis diagnosis. The aim of this work was to investigate the influence of culture filtrates of endophytic fungi isolated from P. aduncum L. on the growth of M. tuberculosis. To achieve this objective, the following methodology was used: a) endophytic fungi were isolated from the leaves and stems of P. aduncum L.; b) the isolated fungi were submitted to submerged bioprocessing; c) culture filtrates from the bioprocess were assayed to evaluate their effect on the growth of M. tuberculosis. We isolated 315 fungal types, which represented 85 morphologies, from different parts of P. aduncum L. The bioassays were performed on 82 culture filtrates and 6 plant extracts and resulted in the detection of 1 culture filtrate that stimulated the growth of M. tuberculosis and 15 that inhibited microbial growth. None of the phytochemical extracts had an effect on the growth of M. tuberculosis. In conclusion, we observed that the endophytic fungi isolated from P. aduncum L. (Piperaceae) produced extracellular metabolites (present in the culture filtrate) that affect the growth of M. tuberculosis. These compounds have the potential to be used as antimicrobials or in the diagnosis of tuberculosis.

INTRODUÇÃO: A tuberculose cutaneoganglionar (TbCG) corresponde a 25,4% dos casos de tuberculose (Tb) extrapulmonar no estado do Amazonas. Os métodos tradicionais, bacteriológicos e histopatológicos envolvem algumas dificuldades diagnósticas, e a reação em cadeia da polimerase (PCR) surge como método alternativo, podendo propiciar resultados específicos e em menor tempo. Nesse sentido, verificou-se a acurácia do protocolo PCR4 de Marchetti et al. no diagnóstico da TbCG comparativamente aos métodos bacteriológicos e histopatológicos. MATERIAIS E MÉTODOS: Realizou-se o nested-PCR com oligonucleotídeos para a IS6110 do complexo do M. tuberculosis em 83 amostras parafinizadas, sendo 52 cutâneas e 31 ganglionares, de pacientes clinicamente suspeitos de TbCG. Todos os casos foram avaliados pelos métodos bacteriológicos e histopatológicos. Foi realizada análise da acurácia entre os resultados obtidos na PCR em relação ao cultivo e à histopatologia. RESULTADOS E DISCUSSÃO: A positividade da PCR em todos os casos estudados foi de 50,6% (42/83), sendo de 59,6% (31/52) em amostras cutâneas e de 35,5% (11/31) nas ganglionares. Em ambos os grupos foram observados resultados falso-positivos e falso-negativos. Algumas hipóteses que podem justificar estes resultados estão relacionadas à presença da IS6110 em micobactérias ambientais da região amazônica e à não-padronização da amostra de DNA amplificado. CONCLUSÃO: O protocolo em avaliação apresentou positividade em percentual semelhante a diferentes protocolos existentes na literatura. Sugere-se o uso da PCR em tecidos parafinizados associada com o cultivo ou com a histopatologia para o diagnóstico definitivo de Tb ganglionar. Para as lesões cutâneas continua sendo necessária a busca de protocolo que amplie a acurácia do método.

BACKGROUND: Cutaneous lymph node tuberculosis (CLTb) represents 25.4% of all cases of extra-pulmonary Tb in the state of Amazonas. The current methods of diagnose including bacteriological and histopathological assays involve some technical difficulties, and the polymerase chain reaction - PCR arise as an alternative method allowing specific results faster than the others. In this context the accuracy of PCR4 Marchetti et al. protocol was compared with traditional methods. MATERIAL AND METHOD: Nested-PCR for IS6110 (123 pb) were applied on 83 CLTb suspicious formalin fixed and paraffin embedded samples of tissues (52 cutaneous and 31 lymph node), obtained from 1997 to 2002. All cases were evaluated by bacteriological and histopathological methods. Accuracy analyses were carried out between the PCR amplification results and those related on bacteriological and histopathological methods. RESULTS AND DISCUSSIONS: Positive results of PCR4 were about 50.6% (59.6% in cutaneous samples and of 35.5% in lymph nodes samples). In both groups were observed false-negative and false-positive results. Some hypotheses that explain those results are related to the presence of IS6110 in environmental mycobacterias in the Amazon region and the absence of standardized DNA concentration to amplification assays. CONCLUSIONS: The proposed protocol was as positive as others ones available in the literature. Definitive Tb diagnostic can be obtained on lymph node paraffin embedded PCR in association with bacteriological or histopathological method. A better accuracy of an amplification assay applied to cutaneous Tb suspicious lesions has to be still under research.

Visando melhorar o diagnóstico laboratorial da Tuberculose Cutânea, foi realizado o estudo da aplicação da técnica de PCR em amostras de tecidos cutâneos macerados, descontaminados (com H2SO4 4% para eliminação da microbiota normal), neutralizados (com NaOH 4%) e armazenadas a -20ºC. Das 37 amostras submetidas ao estudo, 16,22% apresentavam baciloscopias positivas para bacilos álcool-ácidos resistentes (método concentrado) e em 43,24% houve o isolamento do Mycobacterium tuberculosis em meio de cultivo Löwenstein-Jensen. Utilizando-se de primers para a região 16S rDNA do M. tuberculosis, o DNA micobacteriano foi detectado em 24,32% das biópsias. A sensibilidade e especificidade da PCR foram 43,7% e 90,4%, respectivamente. Devido à baixa sensibilidade e resultados divergentes entre as técnicas bacteriológicas e PCR (para a seqüência 16S rDNA), as amostras foram repetidas em um novo PCR com primers para a região IS6110. Tanto a sensibilidade como a especificidade da PCR com primers para IS6110 alcançaram 100% em relação ao cultivo. Os resultados confirmam a eficácia da PCR utilizando primers para a seqüência IS6110 e oferecem a possibilidade da técnica ser aplicada em amostras congeladas enviadas por serviços que não identificam o M. tuberculosis por técnicas de biologia molecular.

Seeking to improve the laboratory diagnosis of Cutaneous Tuberculosis, a study was carried out on the application of PCR technique in macerated, decontaminated(with 4% H2SO4 for elimination of normal microbiot), neutralized (with 4% NaOH)biopsies tissues samples stored at -20ºC. Of the 37 samples submitted for study, 16.22% were positive by microscopy for acid-fast bacilli (concentrated method) and in 43.24% the Mycobacterium tuberculosis was isolated in Löwenstein-Jensen medium. Using a M. tuberculosis complex specific primer set (gene sequence for 16S rDNA), the mycobacterial DNA was detected in 24.32% of the biopsies. The sensitivity and specificity of PCR were 43.7% and 90.4%, respectively. Due to low sensitivity and discrepant results between bacteriological techniques and PCR methodology, the samples were repeated in a new PCR with primers for the IS6110 target. The sensitivity and specificity of PCR for the IS6110 target obtained 100% in comparison with the culture method. The results confirm the effectiveness of PCR methodology using primers for the IS6110 gene sequence and permit the PCR method to be applied to frozen cutaneous biopsies sent by services that do not identify the M. tuberculosis by the biology molecular method.

O Estado do Amazonas tem uma alta incidência de tuberculose, 91.4 por 10,000 habitantes (SESAU, 1994), e freqüentemente novas cepas de Mycobacterium tuberculosis resistentes a diversos antibióticos são encontrados (SALEM et.al, 1990). O abandono terapêutico está sendo relacionada aos efeitos colaterais desses antibióticos, contribui para este quadro (PATTISAPU, 1984). Assim faz-se necessário a descoberta de substâncias alternativas com baixo nível de efeitos colaterais negativos para o tratamento de tuberculose. Neste estado existe abundância de plantas utilizadas pela população no combate a várias doenças. Um levantamento foi feito com portadores de tuberculose emtratamento alopático em cinco municípios do estado do Amazonas, para descobrir quais são as plantas utilizadas por eles. Os resultados mostraram que a maioria dos pacientes entrevistados utilizavam plantas medicinas antes e/ou após tratamento alopático. Treze plantas foram citadas como plantas medicinais e utilizadas no tratamento de tuberculose. Chenopodium ambrosioides L., popularmente conhecida por mastruz, foi relatada como a planta mais utilizada, seguida pela Caesalpinia ferrea Mart., jucá e Spilanthes acmella D.C., jambu. Este estudo se concentra no mastruz por causa da baixa utilização das outras. Não encontramos um efeito significativo no comportamento baciloscópio quando o mastruz foi utilizada antes da diagnóstico. Testes de laboratórios "in-vitro" também não mostraram um resultado tubeculocida para mastruz. Outros testes estão sendo feito com as outras plantas citadas.

The Brazilian State of Amazonas has a high incidence of Tuberculosis, 91.4 in 10,000 habitants (SESAU, 1994) and resistant strains of Mycobacterium tuberculosis are frequently being found in the region (SALEM et.al, 1990). These problems have been associated with side effects caused by the antibiotics used to treat Tuberculosis, which have in rum been associated with treatment non-compliance (PATTISAPU, 1984). To resolve this problem a cost effective alternative treatment for Tuberculosis with few or no side effects, needs to be found. Amazonas has an abundance of plants, many of which are used by the lay population for medicinal purposes. A survey was carried out in five towns of the region, interviewing patients receiving treatment for Tuberculosis, to find out whether and which plants have been used to treat Tuberculosis. Results showed that the majority of patients in the sample had used medicinal plants before or after diagnosis of Tuberculoses. Thirteen different plants were recorded for this purpose. Chenopodium ambrosioides L, popularly known as Mastruz, was the most commonly used, followed by Caesalpinia ferrea Mart. Jucá and Spilanthes acmella DC. Jambu. This study concentrates on Mastruz as it was used more frequently than the other medicinal plants. No significant effects on baciloscopy test results were found when Mastruz was used before diagnosis. ln-vitro laboratory tests have also not shown any tuberculocidal effects for Mastruz. Further tests are being carried out on the other medicinal plants.